Цитология и диагностика: как подступиться?

Автор статьи: Maxey L. Wellman, DVM, PhD Diplomate ACVP (Clinical Pathology) Associate Professor Department of Veterinary Biosciences College of Veterinary Medicine The Ohio State University Columbus, Ohio 43210

Перевод статьи: Мария Оксюкевич, ветеринарная клиника "Медвет", Москва

Ключевые слова:

-цитология

-новообразования

-тонкоигольная аспирационная биопсия

-мазки-отпечатки

-злокачественность

Цитология микроскопически оценивает клетки. Цитологическая оценка может быть очень полезной в клинической диагностики опухолей. Образцы для цитологического исследование могут быть взяты из большинства мест и различных тканей. Цитология не инвазивный метод, и большинство образцов могут быть взяты амбулаторно. Забор материала может быть выполнен с использование не дорогого оборудования, которое общедоступно в большинстве ветеринарных клиник. Интерпретация анализа может быть готова в тот же день, если же использовалась сторонняя лаборатория, то результаты могут быть доступны в течении 24 часов. Осложнения после взятия цитологического образца встречаются очень редко и как правило, ограничиваются незначительными кровоизлияниями. Инфицирование, повреждение соседних структур и распространение опухолевых клеток встречается крайне редко.

Хотя, цитология больше рассматривается в качестве скринингово метода, многие реакции могут быть с точностью классифицированы на воспалительные, гиперпластические или опуховолевые. При опухолевых процессах, опытный цитолог может окончательно диагностировать некоторые специфические новообразования, поставить предварительный диагноз для многих типов опухолей, выявить участки метастозирования опухоли, а так же осуществлять контроль повторного роста опухоли при противораковом лечении. Информация полученная от цитолога может быть полезна для постановки диагноза, определения дальнейшего прогноза и формирования диагностического и лечебного плана. Существенным недостатком цитологии является отсутствие тканевой структуры. Нахождение опухолевых клеток в тканях имеет решающие значение в определении диагноза многих типов опухолей, оценке хирургического края и определение является ли доброкачественной или злокачественной опухоль.

Подготовка для сбора проб и образцов

Выбор области из которой можно взять образец для цитологического исследования зависит от того где клинически обнаруживается новообразование. Неопластические процессы могут привести к образованию опухолевых масс, которые вторгаются в нормальную паренному органа тем самым вызывая увеличение его, вызывают воспаление или кровотечение, или приводят к ненормальным выделениям или выпоту. Существуют многочисленные статьи, списывающие методы сбора образцов из различных тканей, а так же специальные методы, которые не обсуждаются в этой статье.

Образцы для цитологического исследования собираются с помощью тонкоигольной аспирационной биопсии,мазков-отпечатков и соскобов с ткани. Из поверхностных кожных, подкожных узелков и легкодоступных тканей, таких как перефирические лимфатические узлы легко взять образец с помощью тонкоигольной аспирационной биопсии. Образцы из изъявленных новообразований могут быть взяты с помощью мазков-отпечатков, тонкоигольной аспирационой биопсии или с помощью соскоба. Ультразвуковая диагностика является полезной для взятия биопсии из очаговых или диффузных опухолевых инфильтратов внутренних органов ; с помощью УЗИ увеличивается вероятность получения диагностической пробы и снижается риск осложнений. Подготовка образца и интерпретация рассматриваются в других разделах данной статьи.

Цитологическая интерпретация

Интрапретация цитологических образцов требует знаний нормальной клеточной и тканевой морфологии. Что бы избежать недостоверных результатов, цитологические выводы должны быть соотнесены с другими клиническими и лабораторными данными,и с анамнезом появления опухоли. Цитолог должен знать краткую историю пациента, результаты обследования и диагностических тестов, место с которого был взят образец и предварительный клинический диагноз.

Оценка цитологических препаратов требует определенного шаблона, который включает в себя общую и микроскопическую оценку. Цитологические мазки и отпечатки должны быть определенного качества и в них должны обнаруживаться скопления из клеток, которые в дальнейшем просматриваются под микроскопом. Препарат оценивает на объективе 10х на насыщенность клетками образца, по возможности определение типа клеток и нахождения области, которая в дальнейшем будет рассмотрена под большим увеличением. Просматривать все стекло на увеличении 10х важно,так как многие цитологические образцы распространяются только на небольшую часть препарата.

Цель увеличения 100х (объектив для масла) является детальное изучения клеток. На этом увеличении лучше всего оценивать изменения в ядре и морфологические характеристики опухолевых клеток. Интрепретированы и рассмотрены должны быть только неповрежденные клетки. В измененных клетках можно увидеть сильное увеличение ядра, бледное окрашивание, изменение хроматина и нуклеол, все это может быть истолковано,как цитологическая характеристика опухолевых клеток.

Воспаление и гиперплазия

Многие опухоли вызывают воспалительную реакцию, что может маскировать опухолевые клетки. Воспаление характеризуется смешанной популяцией клеток, включая нейтрофилы, лимфоциты, плазматические клетки, эозинофилы, моноциты и макрофаги. Наличие воспаления может быть проблемой в цитологической диагностики новообразований из-за отсутствия архитектуры ткани и разграничения между воспалением и опухолью.

Воспалительная реакция часто приводит к гиперплазии окружающей ткани. Клетки из гиперплазированной ткани напоминают нормальные, только выглядят более незрелыми. Цитологическая характеристика гиперплазированных клеток : большие ядра с мелкозернистым хроматином и явными нуклеолами. Цитоплазма часто базофильного цвета. Гиперпластические клетки имеют относительно постоянное ядерно-цитоплазмотическое соотношение(ЯЦО, соотношение размера ядра с количеством цитоплазмы), это является важной особенностью в различии опухолевыми клетками. Различия между гиперплазией и доброкачественными опухолями часто должны быть выявлены гистологически.

Цитологические особенности новообразований

Новообразованием обычно называются те участки, где цитологически не выявляется клетки воспаления и клетки нормальной ткани. Например, наличие клеток плоского эпителия в аспирате из лимфатических узлов может говорить о метастазе новообразования. Для новообразований характерно клонирования определенного типа клеток, поэтому клетки опухоли могут обнаруживаться цитологически в различных местах. Описано это в виде однородных или мономорфных популяций клеток, хотя клетки могут быть морфологически различны. Цитологические особенности опухолевых клеток значительно различаются в зависимости от вида клеток. В общем опухолевые клетки являются большими поразмеру и полиморфные по сравнению с нормальными клетками той же популяции.

Доброкачественные опухоли дают клетки, которые являются относительно однородными по размеру и внешнему виду. Ядра имеют одинаковый хроматин, нуклеолы обычно маленькие и часто незаметные. Редко ядра доброкачественных опухолей превышают в два-три раза размер эритроцитов в диаметре. Существует незначительный разброс ЯЦО в доброкачественных опухолях.

В отличие от доброкачественной опухоли клетки злокачественной опухоли имею плеоморфный внешний вид. Хотя плеоморфизм может коррелироваться с клиническими поведением некоторых опухолей. Например,клетки некоторых опухолей , которые ведут себя достаточно благоприятно, могут казаться очень плеоморфными (например гистиоцитома) и клетки от некоторых клинически агрессивных злокачественных опухолей не очень плеоморфными (например карцинома щитовидной железы).

В злокачественных клетках часто наблюдается от умеренной до выраженной вариации размеров клеток, что называется анизоцитозом. Клетки из злокачественных опухолей,как правило намного крупнее,чем здоровые клетки того же типа. Ядерно-цитоплазмотическое соотношение(ЯЦО) часто заметно варьируется от клетки к клетки. Для большинства опухолей характерно высокое ЯЦО. Лимфоидные клетки, однако так же имеют высокое ядерно-цитоплазмотическое соотношение. ЯЦО во многих лимфоидных новообразованиях уменьшается, по сравнению с нормальной тканью. Злокачественные клетки некоторых опухолей, по всей видимости, находятся на разных стадиях дифференцировки и могут проявлять асинхронность в созревании между ядром и цитоплазмой. Например, некоторые клетки плоскоклеточного рака могут показаться незрелыми, а некоторые наоборот, часть клеток имеют развитое ядро и не развитую цитоплазму, а другая часть имеет не развитое ядро и развитую цитоплазму.

Ядерные изменения имеют первостепенное значение для определения злокачественное ли новообразование. Мысль о злокачественном новообразовании может приходить при отсутствии воспаления и других причин дисплазии и наличие 3-х и более ядерных критериев злокачественности в большинстве клеток. Злокачественные клетки могут иметь большие ядра 10-12 мкм в диаметре(макроядро), что соответсвует примерно размеру нейтрофила. В злокачественных клетках наблюдается изменение размера ядра (анизокариоз). Многоядерность не считается критерием злокачественности,если ядра внутри клетки не обладают признаки злокачественности. Если в клетки содержится не четное количество ядер и они различаются по размеру между собой, то это может считаться одним из признаков злокачественности. Большое количество митозов не всегда указывает на новообразование. Однако, атипичные митозы,как правило, связаны со злокачественными новообразованиями. Рисунок хроматина в ядре варьируется в зависимости от типа опухоли. Хроматин может быть глыбчатым, как в опухолевых лимфоцитах или может быть крупно зернистым и неравномерно распределен, как в некоторых карциномах. Ядерная мембрана может быть неравномерной , угловатой. Некоторые злокачественные клетки имеют вакуолизацию цитоплазмы. Нулеолы (макронуклеолы) могут быть большими в злокачественных опухолях. Нуклеолы более 5 мкм в диаметре (эритроциты от 5 - 7 мкм в диаметре ) наводят на мысль о злокачествлении. В пределах одной клетки может содержаться несколько нуклеол и они могут быть неправильной формы. Анизонуклеозис (изменение размера нуклеол) наблюдается достаточно часто в злокачественных клетках.

Цитоплазматические изменения в клетках могут помочь в определении степени дифференциации между доброкачественными и злокачественными опухолями, но не так сильно, как степень озлокачествления на уровне ядра. Цитоплазма опухолевой клетки может быть более базофильной, чем цитоплазма нормальной клетки. Некоторые опухолевые клетки имеют аномальную вакуолизацию и/или включение гранул.

Цитологическое исследование выпотов

Распознавание опухолевых клеток в выпотных жидкостях зависит от опыта цитолога. Необходимо идентифицировать аномальный тип клеток и распознать критерии злокачественности. Это сделать порой трудно, так как новообразования в грудной и брюшной полости могут вызывать воспаление , а выпоты содержать гиперплазированный мезотелий и клетки воспаления. Реактивный мезотелий может напоминать клетки злокачественных новообразований и характеризуется повышенной базофилией, изменением размеров клетки, появлением многомерных клеток и большим количеством митозов. Реактивный мезотелий может располагаться в скоплениях, что тоже характерно для злокачественных клеток. К сожалению нет морфологических критериев, которые помогут четко разграничить злокачественные клетки от реактивных клеток мезотелия.

Лимфома является частой причиной опухолевого выпота у мелких домашних животных, особенно у кошек. Выпотная жидкость от животных с лимфомой часто содержит большое количество опухолевых лимфоцитов, которые обычно немного больше чем нормальные зрелые лимфоциты. Ядра, как правило округлые, но могут быть неправильной формы или с отступом. Хроматин нежный, присутствует одна или несколько нуклеол. цитоплазма различная в количестве и интенсивности окрашивания.

Помимо лимфомы у мелких домашних животных часто диагностируются следующие опухоли , вызывающие выпоты в брюшную и грудную полости, аденокарциномы (молочная железа, бронхиолы, щитовидная железа, поджелудочная железа, потовые железы), переходно-клеточный рак и плоскоклеточный рак. В выпотных жидкостях так же можно увидеть клетки из опухолей тучных клеток и мезотелиомы. Эти опухоли отслаиваются легко и многочисленные опухолевые клетки проявляются цитологически. Тем не менее во многих выпотных жидкостях опухолевые клетки не обнаруживаются цитологически. Гемангиосаркома, меланома - опухоли, которые могут вызывать выпоты, но клетки плохо отслаиваются.

Выпоты перикарда тоже могут быть оценены цитологически. Хотя опухоли являются достаточно частой причиной образования экссудативного выпота перикарда у собак, цитологическая оценка считается не надежным методом диагностик между опухолевым и не опухолевым процессами.

Figure 1. Aspirate from a mast cell tumor. Three mast cells and one eosinophil are present. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000)

Figure 2. Neoplastic lymphocytes with convoluted nuclei typical of some cutaneous lymphomas. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000)

Опухоли кожи

Опухоли, вовлекающие в процесс кожу и подкожную клетчатку часто встречаются у собак и кошек. Образцы из кожи и подкожной клетчатки легко получить для цитологической оценки и для дифференциации между опухолевым и неопухолевым процессами. Цитологическая точность составляется 74% для диагностики опухолей кожи и окружающих тканей. Цитологическая картина наиболее часто встречающихся опухолей собак и кошек представлена ниже.

Круглоклеточные опухоли

Некоторые опухоли кожи могут быть окончательно диагностированы с помощью цитологии. Круглоклеточными опухоли их называют из-за характерно внешнего вида цитологически и гистологически. Клетки круглоклеточных опухолей круглые, цитоплазма четко ограничена. Большинство этих клеток не образуют скопления и лежат разрозненно. При тонкоигольной аспирационной биопсии дают многоклеточный материал. Кркглоклеточные опухоли включают опухоли тучных клеток, лимфосаркомы, плазмоцитомы, гистиоцитомы и трансмиссивную венерическую саркому. Клети из базальноклеточных опухолей и меланом так же могут проявляться цитологически в виде круглых клеток, но гистологически эти опухоли не считаются круглоклеточными.

Мастоцитома

Мастоцитомы - самые распространенные опухоли кожи у собак; у кошек эти опухоли чаще встречаются во внутренних органах, но так же могут наблюдаться и на коже. Цитологическая оценка является точным метод диагностики мастоцитом. На самом деле, многие из них проще диагнотируются цитологически, чем гистологически. Аспираты из мастоцитом, как правило очень информативны. Тучные клетки, как правило округлой или овальной формы ; число эозинофилов и/или фибробластов является переменным. Круглые или овальные ядра имеют зернистые хроматин, но может просматриваться плохо из-за большого количества цитоплазматических гранул(рисунок 1). Эти гранулы имеют округлую или овальную форму разного размера и являются отличительной чертой тучных клеток. При окрашивание по Романовскому гранулы от сине-черно до пурпурно-красного цвета. При окраске по Diff-Quik гранулы могут плохо просматриваться или вообще быть не видны.

Мастоцитома у собак может быть дифференцирована в зависимости от их грануляции и анаплазии клеток. Высоко дифференцированные опухоли содержат большое количество гранул, я как низко-дефференцированные содержат небольшое количество гранул. Собаки с низко-дифференцированными опухолями имеют значительно худший прогноз, чем с высоко-дифференцироваными опухолями, но при этом опухоли тучных клеток могут себя вести достаточно непредсказуемо. Даже высоко-дифференцированные опухоли тучных клеток имеют высокий процент метастазирования. Опухоли тучных клеток необходимо дифференцировать от воспалительных процессов, содержащие тучные клетки. Присутствие воспалительных клеток, таких как нейтрофилы и макрофаги, облегчает эту дифференцировку, но так же может потребоваться гистологическое исследование в некоторых случаях.

Лимфома

Кожная лимфома у собак и кошек встречается редко. Аспират кожной лимфомы обычно многоклеточный и состоит из однородной популяции низкодифференцированных лимфоидных клеток. Цитологически эти клетки крупнее, чем нейтрофилы и имеют базофильную цитоплазму.

Figure 3. Aspirate from a plasma cell tumor. Note the perinuclear clear area in some cells. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Figure 4. Aspirate from a histiocytoma. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Figure 5. Aspirate from a transmissible venereal tumor. (Wright’s-Giem- sa stain, ×1000).

Ядро круглой или неправильной формы, нежный рисунок хроматина. Нулкеолы могут присутствовать от одной до нескольких. В цитологической картине лифом могут присутствовать малые лимфоциты. Эти лимфоцита имеют меньший размер, чем нейтрофилы. В диагностики кожной лимфомы необходимо помимо цитологического подтверждения еще и гистологическое.

Кожная плазмоцитома

Кожная плазмоцитома является доброкачественным новообразованием, которое должно быть включено в дифференциальную диагностику кожных круглоклеточных опухолей. Эти опухоли чаще всего встречаются в районе губ и ушей у собак. Клетки плазмоцитомы округлой или овальной формы и имеют крупные ядра с одной небольшого размера нуклеолой. Цитоплазма слабо-базофильного цвета. Есть пренуклеарная зона, которая типичная для плазматических клеток. Могут быть двуядерные и многоядерные клетки, митостатический уровень от низкого до умеренного.

Гистиоцитома

Доброкачественная гистиоцитома очень распространенная опухоль кожи у собак. Цитологические образцы из гистиоцитомы содержат однородную популяцию клеток округлой, овальной или неправильной формы , морфологически напоминающие моноциты или эпителиоидные клетки. Ядра расположены эксцентрично и различаются по размеру и форма. Цитоплазма слобо-базофильного цвета с четки или зазубренными границами. Пункта из гистиоцитомы может содержать лимфоциты и плазмотические клетки. Гистиоцитома может содержать вторичное воспаление; в этом случае цитологическая картина напоминает хроническое воспаление и для окончательного диагноза может потребоваться гистологическое исследование. Гистологически трудно дифференцировать гистиоцитомц от крупноклеточной лимфомы, гистиоцитарной лимфомы, трансмиссивной венерической саркомы, банально-клеточного рака.

Трансмиссивная венерическая саркома

Трансмиссивная венерическая опухоль (TVT) представляет собой круглоклеточную опухоль собак. Чаще всего такие опухоли встречаются на слизистых оболочках наружных половых органов, но так же бывает экстрагенитальное расположение. Цитологические образцы из TVT многоклеточные, клетки округлой или овальной формы с округлыми или овальными ядрами. Ядра часто расположены эксцентрично и имеют различные размеры. Хроматин крупнозернистый и просматривается единичная нуклеола. Клетки TVT имеют обильную цитоплазму с четкоочерченными краями. Цитоплазма может быть слабо- или умеренно- базофильного цвета и часто содержит вакуоли. Цитологические образцы из TVT могут содержать лимфоциты, макрофаги и плазмотические клетки. Не смотря на характерное расположение трансмиссионной венерической саркомы, которое может быть полезно для цитологической интропретации, для окончательной дифференциации от крупноклеточной лимфомы и гистиоцитомы может потребоваться гистологическое исследование. TVT обычно имеют более обильную цитоплазму, чем большинство опухолевых лимфоидных клеток и более округлые ядра, чем в гистиоцитоме.

Figure 6. Aspirate from a malignant melanoma. A melanocyte with fine pigment granules and a melanophage with coarse pigment granules are present. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Меланома

Меланомы часто встречаются у собак и редко у кошек. Меланомы часто не классифицируют как отдельные кожные опухоли, они не вписываются эпителиальные и мезенхимальные опухоли. Меланомы являются нейроэктодермального происхождения ,и ее клетки могут иметь как эпителиальные, так и мезенхимальные характеристики опухоли. Большинство кожных меленном являются доброкачественными, в то время как оральные или расположенные на дистальных конечностях являются злокачественными.

Меланоциты производят пигмент меланин, который цитологически очень хорошо виден в виде гранул от коричневого до зеленовато-черного цвета. Гранулы меланина часто легче обнаруживаются цитологически, чем гистологически, и их присутствие является важным критерием для постановки диагноза. Меланомы могут слабо и сильно пигментированы. Если опухоль сильно пигментирована, то она легко распознается цитологически . Даже в неокращенном образце можно обнаружить гранулы. Количество меланина не обязательно указывает на степень злокачественности. Плохопигментированные меланомы бывает трудно распознать цитологически. В большинстве случаем при тщательном изучении образца обнаруживаются несколько пигментированных меланоцитов. Если гранулы не найдены, то меленному сложно отличить цитологически от других опухолей мезенхимального происхождения.

Цитологически клетки расположены разрозненно или в скоплениях. Клетки круглой или ветеринообразной формы. Животные с меланомой состоящей из круглых клеток имеют более плохо прогноз(срок жизни), чем животные у которых обнаружена меланома из ветеринообразных клеток. Ядра круглой или овальной формы. Цитоплазма умеренная с плохоочерченными границами. Клетки миланомы следует отличать от пигментных макрофагов. Макрофаги могут содержать большие гранулы гемосидерина или меланина и их цитоплазма вакуолизирована. Гранулы гемосидерина и меланина в макрофагах более грубые и разного размера, нежели в меланоцитах.

Эпителиальные опухоли кожи

Есть несколько характеристик эпителиальных опухолей, которые могут помочь в постановке диагноза. Эпителиальные опухоли дают многоклеточные пунктаты. Они могут располагать в скоплениях и разрозненно. Эпителиальные клетки круглые с обильной цитоплазмой с четко очерченными границами. Многие эпителиальные опухоли, которые встречаются на коже , имеют низкий класс цитологической злокачественности, из-за чего трудно дифференцировать злокачественное новообразование от доброкачественного.

Figure 7. Aspirate from a squamous cell carcinoma. Two large neoplastic squamous epithelial cells are present. The neutrophils are typical of the in- flammatory response that often accompanies squamous cell carcinomas. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Figure 8. Aspirate from a basal cell tumor. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Figure 9. Aspirate from a perianal gland adenoma. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Плоскоклеточный рак

Плоскоклеточный рак, как правило имеют четкую слоистость. В случае, если дифференциация низкая, характерно наличие крупных, анапластических клеток с гигантскими полиморфными ядрами. Края цитоплазмы могут казаться угловатыми из-за выработки кератина (Рисунок 7). Часто обнаруживаются мелкие клетки ороговевающего эпителия и обломки кератина, что помогает диагностировать плоскоклеточный рак. Кератин может вызывать хроническую воспалительную реакцию. Хроническое воспаление чаще всего связано с дисплазией клеток эпителия, которую иногда может быть затруднительно цитологически отличить от высокодифференцированной плоскоклеточного рака. Окончательный диагноз «плоскоклеточный рак» ставится гистологически.

Базально-клеточный рак

Опухоли базальных клеток образуются из мультипотентных зародышевых эпидермальных клеток и являются достаточно распространенными образованиями кожи кошек и собак. Опухоли могут быть пигментированы, особенно у кошек, и часто содержат кисты. Как правило, опухоли базальных клеток доброкачественные, однако биологический характер сложно предсказать как цитологически, так и гистологически. В аспиратах из таких опухолей часто обнаруживаются нити и ленты из мелких одинаковых эпителиальных клеток. В некоторых случаях могут обнаруживаться только единичные клетки. Клетки имеют максимальное соотношение ядро:цитоплазма c небольшой базофильной цитоплазмой (Рисунок 8). Клетки не специфичны и как правило доброкачественные. Рекомендуется гистологическое подтверждение диагноза, так как цитологически подобным же образом могут выглядеть базилярные резервные клетки при других кожных новообразованиях. Пигментированные опухоли базальных клеток содержат меланоциты из-за которых данные опухоли тяжело дифференцировать от меланомы.

Опухоли сальных желез

Опухоли сальных желез чаще всего встречаются у пожилых собак и в большинстве своем доброкачественные. Клетки опухолей сальных желез часто образуют сгустки, из-за чего может быть затруднительна цитологическая диагностика отдельных клеток. Клетки имеют небольшое, центрально расположенное ядро и обильную пвспениеную цитоплазму. Иногда могут встречаться резервные клетки меньших размеров с более вспененной цитоплазмой и более высоким соотношением ядра к цитоплазме. Цитологическая картина аденокарциномы сальных желез выглядит как скопление резервных клеток с выраженной зернистостью и злокачественным характером. Редко, встречаются клетки с цитоплазматическим секреторным материалом, который иногда может быть достаточно обильным, и смещать ядро к периферии клетки (перстневидные клетки).

Опухоли перианальных желез

Опухоли перианальных желез, большинство из которых аденомы, чаще встречаются у здоровых, пожилых кобелей. Цитологически и гистологически дифференциировать узловую гиперплазию перианальных желез от аденомы достаточно сложно. Клетки опухолей перианальных желез отслаиваются легко и выглядят как сгустки разного размера или отдельные клетки многоугольной формы. Клетки имеют круглое, расположенное по центру ядро, которое часто содержит ядрышки. Цитоплазма объемная, розово-голубая, с четкой зернистостью (Рисунок 9). Клетки напоминают гепатоциты, поэтому такие опухоли часто упоминаются как опухоли гепатоидной железы. Перианальная аденокарценома встречается достаточно редко. Клетки перианльной аденокарциномы характеризуются различными размерами ядер, а также количеством и размером ядрышек. Высокодифференцированную перианальную аденокарциному сложно дифференциировать от аденомы как цитологически, так и гистологически.

Figure 10. Aspirate from a lipoma. Two adipocytes are present. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Figure 11. Aspirate from a hemangiopericytoma. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Мезенхимальные опухоли кожи

Цитологическая картина мезенхимальных опухолей отличается от описаний эпителиальных новообразований. Как правило, мезенхимальные опухоли имеют плохую слоистость, так как клетки внедряются во внеклеточную матрицу как волокнистая соединительная ткань, хрящь или кость. Цитологически клетки лежат в скоплениях или разрозненно. Клетки большинства мезенхимальных опухолей имеют веретенообразную форму, с обильной цитоплазмой и плохоопределяемыми границами. Ядра могут быть веретеновидными или овальными. Предварительный диагноз «мезинхемальное новообразование кожи» можно ставить даже в том случае, если цитологически происхождение клетки не определяется. Доброкачественные или высокодифференцированные злокачественные мезенхимальные новообразования могут напоминать активно пролиферирующую грануляцию тканей. Окончательный диагноз и характер мезинхемальных новообразований требует гистологического подтверждения.

Липомы

Липомы часто образуются в подкожных тканях собак и кошек. Макроскопически аспираты из липом содержат жир и мазки не сохнут. Клетки часто разрушаются, а фиксация спиртом, используемая при некоторых способах окраски мазков растворяет жир; таким образом микроскопический препарат часто цитологически кажется бесклеточным. Цитологически невозможно отличить интактные клетки липомы от нормальных адипоцитов. Адипоциты – крупные клетки, наполненные жиром (Рисунок 10). Микроскопические препараты липомного образования необходимо тщательно исследовать, так как многие злокачественные опухоли прорастают в подкожные жировые слои и могут быть обнаружены цитологически.

Липосаркомы встречаются редко. Аспираты из липосаркомы часто имеют высокую клеточность. Гистопатологически у этих клеток обильная цитоплазма, однако при этом цитологически оценить клеточную мембрану бывает затруднительно. Часто встречаются клетки с вакуолями в цитоплазме, число и размер которых может варьироваться. Обычно на заднем фоне видно жировые вакуоли. Диагноз «липома» часто ставится цитологически.

Гемангиоперицитома

Гамангиоперицитома – новообразование неизвестного происхождения, которое может образовываться вокруг кровеносных сосудов. Опухоль обычно встречается на конечностях пожилых собак. Клетки имеют достаточно хорошую клеточность по сравнению с другими мезенхимальными новообразованиями. Как правило, обнаруживаются отдельные клетки с круглыми, однородными ядрами. Цитоплазма варьируется по объему, а цитоплазматическая мембрана расплывчата (Рисунок 11). В тех местах, где мазок толще могут встречаться завитки из клеток, которые образуют характерные завихрения при гистопатологическим исследовании. Изредка могут встречаться многоядерные клетки. Цитологически бывает сложно дифференцировать гемангиоперицитомы от фибросаркомы, поэтому диагноз должен подтверждаться гистологически.

Цитологическое исследование лимфатических узлов

Лимфаденопатия может быть связана с лимфоидной гиперплазией, воспалением или неоплазией кроветворных клеток или метастатическим процессом. Аспираты тонкоигольной биопсии из увеличенных лимфатических узлов часто помогают поставить диагноз быстро и с минимальными затратами. Также, для цитолога немаловажным является знать анамнез и клиническую картину , которые описывает врач-клиницист. Например, иммунизация может привести к такой диффузной паракортикальной гиперплазии , что лимфоциты будут казаться неопластичными. Собака с несколькими увеличенными периферическими лимфатическими узлами скорее будет иметь лимфому, чем собака с одним увеличенным лимфатическим узлом. У молодых кошек с увеличенными периферическими лимфатическими узлами помимо лимфомы могут быть неопухолевые пролиферативные заболевания.

Figure 12. Aspirate from a lymph node from a dog with lymphoma. (Wright’s-Giemsa stain, ×1000).

Цитологическая картина нормальных лимфатических узлов

Цитолог должен быть знаком с нормальной морфологией лимфатического узла. Нормальные лимфатические узлы состоят из неоднородной популяции клеток.

Преобладающие клетки – зрелые лимфоциты , которые выглядят меньше, чем нейтрофилы. Ядро по размеру схоже с размером ядра эритроцитов. Зрелые лимфоциты имеют очень высокое соотношение ЯЦО, грубый хроматин и скудную цитоплазму. Ядро обычно отсутствует, но может быть одно ядрышко. Пролимфоциты- это незрелые лимфатические клетки ,немного больше, чем нейтрофилы. Хроматин в пролимфоцитах собран в группу, и есть умеренное количество цитоплазмы. Зрелые лимфоциты и пролимфоциты составляют 90% - 95% нормальной популяции клеток лимфатического узла. Лимфобласты - большие клетки( в 2-4 раза больше зрелых лимфоцитов) с хорошо выраженном хроматином, имеют 1-2 ядра. Цитоплазма может быть обильной или не выраженной. Лимфобласты представляют менее , чем

15% от клеток нормального лимфатического узла.

Случайные плазматические клетки могут присутствовать в аспирате из нормальных лимфатических узлов. Плазматические клетки имеют необычные ядра, богатую базофилами цитоплазму и четкую перинуклеарную зону. Клетки воспаления, такие как нейтрофилы, макрофаги и лаброциты редки в большинстве своем в цитологии нормальных лимфатических узлов. Однако, популяция клеток в лимфоидной ткани может варьировать в зависимости от локализации. Может казаться, что лимфоидная ткань схожа с желудочно-кишечным трактом из-за большого количества плазматических клеток воспаления так как происходит постоянное воздействие аллергена.

Цитологическая картина гиперпластических лимфоузлов

Лимфатические неоплазии должны быть дифференцированы от лимфатической гиперплазии. Гиперпластичные лимфатические узлы состоят из лимфатических клеток на всех стадиях развития, тогда как лимфатические неоплазии обычно состоят из одной популяции клеток, находящихся на одной и той же стадии развития. Смешанная популяция клеток в гиперпластических лимфоузлах может казаться схожей с нормальной цитологической картиной лимфатического узла, но с большим количеством пролимфоцитов и лимфобластов. Можно увидеть большое количество плазматических клеток и макрофагов, также может присутствовать случайный нейтрофил. Митотических фигур может быть много, они будут без морфологических изменений.

Цитология измененных лимфатических узлов

Лимфатические новообразования относительно распространены у собак и кошек и могут вовлекать различные ткани , включая лимфатические узлы, кишечник, тимус , органы лимфопоэза. В лимфатических узлах, нормальная гетерогенная популяция зрелых лимфоцитов заменяется на мономорфную (или иногда диморфную) популяцию лимфоидных клеток. Плазматические клетки и клетки воспаления встречаются редко. Морфология клеток варьирует в зависимости от степени дифференциации и типа лимфоцита. Лимфома, состоящая из незрелых клеток обычно несложно диагностируется с помощью цитологии. Лимфомы, из незрелых лимфоцитов трудно диагностировать цитологическим методом. Степень дифференцировки и гистологическая классификация лимфомы влияют на лечение и прогноз. Система классификации лимфомы собак основана в Национальном онкологическом институте ( NCI). Гистологическая классификация основана на архитектуре ткани, морфологии клетки и митотическом уровне; цитологическая классификация почти полностью базируется на характеристике ядра, включающей в себя размер, форму ядра , структуру хроматина, а также количество и размер ядрышек. Цитологическая классификация не так надежна как гистологическая, но все же у них есть общие типы клеток. Подобной системы классификации лимфомы кошек нет. Степень тяжести лимфомы зависит от клинической картины. Опухоли легкой степени тяжести наименее агрессивны и имеют лучшей прогноз, тогда как опухоли высокой степени тяжести являются самыми агрессивными и имеют неблагоприятный прогноз. Большинство собачьих лимфом ( 66%), классифицированных как типы с высокой степенью тяжести включают лимфобластную, иммунобластную и мелкоклеточную лимфому. Крупноклеточная лимфома имеет высокий уровень метастатического процесса и тоже может быть рассмотрена как агрессивная. Эти более агрессивные опухоли легче диагностировать при помощи цитологии.

Злокачественные новообразования

На злокачественность новообразования указывает присутствие в лимфатическом узле нелимфатических, неопластических клеток. Эти клетки можно дифференцировать как злокачественные , используя общие цитологические критерии злокачественности. По цитоплазме можно отличить клетки карциномы, саркомы и круглоклеточной опухоли. Карциномы с большей вероятностью будут метастазировать в лимфатические узлы , чем саркомы и могут отличаться чем, что клетки будут располагаться группами.

В большинстве метастатических новообразований, популяция лимфоидных клеток не изменяется. Однако, при злокачественной плоскоклеточной карциноме могут быть нейтрофилы вследствие кератин индуцированного воспаления. При появлении метастазов, весь узел может быть поражен опухолевыми клетками. Отсутствие опухолевых клеток не исключает метостазы.

Заключение

Большинство ветеринарных врачей могут использовать цитологическое исследование, чтобы дифференцировать воспаление от новообразований и тем самым получить информацию в каком диагностическом направлении двигаться. Опытный цитолог может окончательно диагностировать некоторые специфические новообразования и поставить предварительный диагноз для многих других типов опухолей. Эта информация полезна при установлении прогноза и назначения соответствующей терапии. Цитологические результаты должны быть соотнесены с клинической картиной и лабораторными исследованиями. Когда диагноз по результатам цитологии нельзя поставить с точностью, необходимо подтверждать его гистологически. Поскольку данная область продолжает развиваться, диагноз новообразование может быть подтвержден с помощью компьютеризованной визуализации , цитохимических исследований, иммунофенотипирования гемопоэтических опухолей, а также оценки онкогенов и хромосомных аномалий, чтобы определить прогноз.

#цитология